烟雾病  
胶质瘤
烟雾病相关知识
烟雾病病毒生物标志物

  烟雾病病(MMD)的特征是颈内动脉末端部分或大脑前动脉和大脑中动脉近端部分的进行性双侧闭塞,以及狭窄病变附近的细小侧支网络的发展。虽然磁共振成像/血管造影(MRI / MRA)是诊断MMD的可靠工具,但脑血管造影是金标准测试。然而,这些成像工具要么昂贵要么具有侵入性,并且通常不适合用于筛选或后续应用。对于需要镇静甚至MRI / MRA的儿科患者尤其如此。此外,与儿童股动脉反复穿刺相关的并发症风险也不容忽视。因此,开发无创的低成本筛查方法可能有助于MMD的临床鉴定。在进行昂贵的侵入性检查后,可以先对患者的家属进行筛查。因此,在随访期间,接受治疗的患者将需要减少数量的MRI / MRA或血管造影评估。
   考虑到这一背景,研究的重点是鉴定MMD的生物标志物,最近的分子研究已经提出了MMD患者血清和脑脊液(CSF)中新的生物标志物候选物。研究还揭示了与健康对照相比,烟雾病患者中各种生长因子,细胞因子和血管生成因子的血浆浓度不同。一项研究报告显着升高的基质金属蛋白酶9(MMP-9),单核细胞趋化蛋白-1,白细胞介素-1β,血管内皮生长因子(VEGF)和血小板衍生生长因子亚基B的血浆浓度,但MMP-血浆浓度较低3,MMD患者金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP)-1和-2与健康对照组相比。此外,血清微RNA让-7c中,α-1-抗胰蛋白酶,和MMP-9可充当用于MMD诊断[作为潜在生物标志物。CSF细胞视黄酸结合蛋白I,碱性成纤维细胞生长因子(FGF),可溶性血管细胞黏附分子1,细胞间粘附分子1,和E-selectin的水平也可以用作生物标记物MMD 。
   循环内皮祖细胞(EPC)和平滑肌祖细胞(SPC)的特定特征可以作为MMD的潜在生物标志物。例如,先前的一项研究报告了成人MMD患者血清循环基质细胞衍生因子-1α和分化簇34(CD34)+ / CXC趋化因子受体4型(CXCR-4)+ - EPCs的高血清水平 。相比之下,另一项研究报道,与健康对照组相比,MMD患者的循环EPC水平降低。此外,参与细胞粘附,细胞迁移,免疫反应和血管发育的基因表达增加,如整合素α3,脑特异性血管生成抑制因子1(BAI1)相关蛋白2样1,N-钙粘蛋白,ephrin(在患有MMD的患者的SPCs中检测到Eph)受体A5和黑素瘤细胞粘附分子。在最近的遗传学研究中,无名指蛋白213(RNF213)也被鉴定为东亚人群中重要的MMD易感基因。一个RNF213变异(c.14576G> A)存在于95%的家族性MMD病例和79%的散发性MMD病例中。另外,该变体与早发型和更严重形式的MMD强烈相关,表明其用作预后生物标志物。然而,该基因的功能尚未得到证实。尽管已经提出了几种特异性生物标志物用于MMD诊断和预后,但迄今为止,没有一种在临床实践中被发现有用。
   在这里,研究人员研究了与健康对照相比,MMD患者内皮细胞集落形成细胞(ECFC)中异常的全基因组CpG甲基化模式。为了鉴定用于MMD诊断的表观遗传生物标志物,研究人员进一步整合了CpG甲基化和mRNA表达谱以鉴定其表达受DNA甲基化依赖性转录修饰调节的基因。研究人员观察到sortilin 1(SORT1)的表达通过其启动子中特定CpG位点的低甲基化而上调。此外,ECFC中SORT1上特定启动子CpG位点处的DNA甲基化状态容易将MMD患者与正常对照区分开,具有高准确性。研究人员提出特定SORT1的DNA甲基化状态 启动子CpG位点可以是MMD的生物标志物。
   根据首尔国立大学医院的机构审查委员会(IRB)(SNUH IRB 1404-006-567)批准的方案,在获得所有参与者的知情同意后,收集来自患有MMD和健康对照的患者的血液样品。所有MMD患者均通过脑血管造影诊断。出于道德原因,不可能招募年龄匹配的控制措施; 因此,选择没有中风,高血压或吸烟史的年轻人。来自18名MMD患者和16名正常对照的样品用于本研究。
   先前已经描述了血沉棕黄层制备和单核细胞(MNC)培养引发ECFC谱系的程序。收集后2小时内处理所有血样(40mL)。将MNCs在含有10%胎儿的内皮细胞生长培养基(EGM-2,Clonetics,San Diego,CA,USA)中涂布在涂有I型胶原蛋白(BD BioCoat,BD Biosciences,Mountain View,CA,USA)的培养皿上。牛血清(FBS)。通过荧光激活细胞分选(FACS)分析和使用针对CD34,激酶插入域受体(KDR),CD133,CD31,CD45和血管性血友病因子(vWF)的抗体的免疫荧光染色来表征ECFC。对于流式细胞术分析,将1×10 6个细胞与10μL藻红蛋白缀合的抗人CD34(BD Biosciences:Catalog#555822),KDR(R&D,Minneapolis,MN,USA:Catalog#FAB357P),CD133( Miltenyi biotec,Bergisch Gladbach,德国:产品目录号130-080-801),CD31(BD Biosciences:产品目录号560983),和CD45(BD Biosciences:Catalog#560975)抗体。使用FACScan流式细胞仪(Becton Dickinson,Franklin Lakes,NJ,USA)和CellQuest软件(Becton Dickinson)分析所得的FACS数据。使用抗CD31(Santa Cruz Biotechnology,Dallas,TX,USA:Catalog#sc-1506)和抗-vWF(DAKO,Glostrup,Denmark:Catalog#M0616)抗体进行免疫荧光染色。
   在人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分离之前,从捐赠脐带样品的每个参与者获得书面知情同意书。梨花女子大学莫东医院IRB批准了这项研究。使用标准方案通过胶原酶消化从新鲜的新生儿脐带静脉中分离HUVEC 。HUVEC在补充有低血清生长补充剂,10%FBS和抗生素 - 抗真菌剂(Gibco-BRL,Gaithersburg,MD,USA)的培养基200中在37℃,5%CO 2下在潮湿气氛中生长。所有实验均在第四和第六细胞传代之间进行。
   使用RNeasy mini试剂盒(Qiagen,Valencia,CA,USA)从培养的细胞中提取总RNA,并根据Affymetrix GeneChip Whole Transcript Sense Target Labeling方案(Thermo Fisher Scientific,Waltham,MA,USA)进行扩增和标记。将得到的标记的互补DNA(cDNA)与Affymetrix Human Gene 2.0 ST Arrays(Thermo Fisher Scientific)杂交。使用Bioconductor“affy”包中的Robust Multiarray Averaging方法对扫描的原始表达值进行背景校正,标准化和总结。得到的log 2转化数据用于进一步分析。为了鉴定差异表达的基因(DEGs),研究人员使用基于经验贝叶斯方法的调节t-统计量。DEGs定义为MMD样品中具有表达水平的基因,与正常样品相比,差异至少1.5倍(|倍数变化(FC)|> 1.5)(P <0.05)。
   使用QIAmp mini试剂盒(Qiagen)根据制造商的说明从ECFC中提取基因组DNA。对于DNA甲基化的全基因组筛选,使用Illumina HumanMethylation450 BeadChip(Illumina,San Diego,CA,USA)平台,其靶向450,000个特异性CpG位点。为了调整探针设计偏差,基于Beta Mixture Quantile方法对β值进行归一化。通过调节的t统计学鉴定差异甲基化的CpG位点。差异甲基化的CpG位点被定义为具有与正常样品相比在MMD样品中显着不同的平均β值(P<0.05和|Δβ| > 0.2)。如果Δβ大于0.2,研究人员认为CpG位点是高甲基化的,如果Δβ小于-0.2,则认为是低甲基化的。
   根据制造商的说明书,使用Superscript II逆转录酶和oligo-(dT)12-18引物(均来自Thermo Fisher Scientific)将1微克总RNA转化为cDNA 。使用含有1μLcDNA,10μLSYBRPremix EX Taq(Takara Bio,Otsu,Japan),0.4μL50×Rox参比染料(Takara)的20μL反应混合物进行逆转录 - 定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)。 Bio)和200nM基因特异性引物。本研究中使用的引物序列列于。反应在7500快速实时PCR系统(Thermo Fisher Scientific)上在95℃下进行30秒,然后进行40个循环:95℃3秒和60℃30秒和单个解离循环95℃15秒,60℃60秒,95℃15秒。所有反应一式三份进行,并且在解离阶段使用解链曲线分析确定反应的特异性。基于使用2-ΔΔCt方法标准化为甘油醛3-磷酸脱氢酶阈值的循环阈值,进行每个靶基因的比较定量。
   用亚硫酸氢盐从ECFC处理提取的基因组DNA将未甲基化的胞嘧啶而不是甲基化的胞嘧啶转化为尿嘧啶,从而允许区分未甲基化和甲基化的胞嘧啶。使用EpiTech Bisulfite试剂盒(Qiagen)根据制造商的说明书进行使用亚硫酸氢盐的DNA修饰。
   研究人员在含有10ng亚硫酸氢盐修饰的基因组DNA,1.5毫摩尔MgCl50μL的反应混合物中进行使用常规PCR亚硫酸氢盐测序PCR(BSP)2,200μM脱氧核苷三磷酸,1U铂Taq聚合酶(赛默飞世尔科技),1× Platinum Taq缓冲液,每种基因的200 nM特异性BSP正向和反向引物。使用MethPrimer软件设计BSP引物。反应在95℃下进行5分钟,然后进行30个循环:95℃30秒,50℃-55℃30秒,72℃30秒,最后72℃伸长步骤。 5分钟。根据制造商的方案,使用QIAquick凝胶提取试剂盒(Qiagen)纯化BSP产物,并连接到pGEM-T Easy克隆载体(Promega,Fitchburg,WI,USA)中。使用标准方法将连接产物用于转化感受态DH5α大肠杆菌细胞(RBC Bioscience,New Taipei City,Taiwan)。使用蓝/白筛选来选择细菌克隆,并使用BSP引物通过菌落PCR确认BSP产物阳性克隆以验证插入物大小。
   来自正常对照N1的ECFC用甲基化抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(Sigma-Aldrich,Darmstadt,Germany)处理,其以各种浓度(0,10和20μM)每天更换3天。
   研究人员使用亚硫酸氢盐焦磷酸测序进行靶启动子区域的甲基化分析。使用PSQ测定设计程序(Qiagen)设计每种引物。用20ng或更少的亚硫酸氢盐转化的gDNA,10μL2×Hot / Start PCR预混物(Enzynomics,Daejeon,Korea),1μL正向引物(10pmole /μL)以20μL的体积进行PCR反应,和1μL生物素化反向引物(10 pmole /μL)。根据一般的焦磷酸测序指南进行扩增,包括在95℃下变性10分钟,然后在95℃下30秒,56℃下30秒,72℃下30秒,以及72的最终延伸,进行50个循环。 °C 10分钟。通过在2.5%琼脂糖凝胶中电泳确认PCR反应(2μL),并通过溴化乙锭染色显现。
   使用链霉抗生物素蛋白Sepharose HP珠(Amersham Biosciences,Piscataway,NJ,USA),按照PSQ 96样品制备指南,从16至18μL生物素化的PCR产物制备ssDNA模板。然后加入测序引物(15pM)用于分析。根据制造商的说明,使用Pyro Gold试剂盒(Biotage,Uppsala,Sweden)在PyroMark ID系统上进行测序。分析的序列列于。
   使用Amaxa HUVEC Nucleofector试剂盒(Lonza,Basel,Switzerland),用增强的绿色荧光蛋白(EGFP)或SORT1表达构建体转染HUVEC。简而言之,用胰蛋白酶消化并沉淀培养至80%至90%汇合的细胞,并用2.0μg质粒DNA(pCMV6-XL5- SORT1,Origene,Rockville,MD,USA)或pmaxGFP载体重悬5×10 5个细胞。使用程序U001在Nucleofection比色皿中的μLNucleofector溶液。然后研究人员加入500μL完全生长培养基并将细胞悬浮24小时。转染后24小时通过RT-qPCR证实SORT1的过表达。
   通过Matrigel测定评估管形成。基底膜基质Matrigel购自BD Biosciences(Billerica,MA,USA)。将基质胶在冰上解冻过夜,并均匀地铺展在24孔板的每个孔(300μL)上。然后将板在37℃温育1小时以使基质胶聚合。将表达构建体转染的HUVEC以每孔4×10 4个细胞接种在涂有Matrigel的24孔板上,并在潮湿的37℃,5%CO 2培养箱中在300μL完全生长培养基中生长16小时。
   为了确定内源性SORT1敲低对管形成的影响,用si SORT1或siNC 转染的HUVEC 培养24小时,然后用培养基200饥饿8小时。饥饿后,siRNA转染的HUVECs接种于1 使用生长因子减少的基质胶基质(BD Biosciences)在Matrigel包被的24孔板上每孔×10 5个细胞并生长6小时以诱导管网络。
   使用光学显微镜和相机以40x放大率观察管状结构。在每孔六个随机选择的区域中测量管长度,并通过Image J软件进行定量。
   根据制造商的说明,使用DNA Mini试剂盒(Thermo Fisher Scientific)从ECFC获得DNA样品。在DNA提取和定量后,用合适的引物组(有义5'-CTGATGCGTCAGCTCCATAG-3'和反义5'-TTCCTGCTTTGTGCAGTCAC-3')对DNA样品进行PCR扩增。所述的测序分析RNF213 c.14576G>的变体是使用ABI 3730XL DNA测序进行的,数据通过ABI测序分析软件(赛默飞世尔科技)来分析。
   所有数据表示为至少三次独立实验的平均值±标准偏差(SD)。使用GraphPad Prism 5软件(GraphPad Software Inc,La Jolla,CA,USA)进行统计学分析。图例中提供了每个分析的详细信息。P值<0.05被认为具有统计学意义。
   研究人员在来自三名MMD患者(MMD1,MMD2,MMD3)和两名正常对照(N1,N2)的ECFC中进行表达微阵列和DNA甲基化微阵列分析,然后选择DEG和差异甲基化启动子CpG位点。为了鉴定可能归因于启动子CpG甲基化变化的差异表达的基因,使用以下选择标准将DNA甲基化分析数据与mRNA表达谱分析数据整合:通过启动子的低甲基化(Δβ<-0.2)上调(FC> 1.5)与正常对照ECFC相比,来自MMD患者的ECFC中的启动子CpG位点处的CpG位点和通过高甲基化(Δβ> 0.2)下调(FC> 1.5)。使用这些标准,选择了五个候选基因。
   载脂蛋白D(APOD)启动子CpG位点(人GRCh38 / hg38装配位置195,583,895-195,583,362,染色体3) - 特别是第一至第四CpG-在来自所有三名患有MMD的患者的ECFC中相对于来自两个正常对照的那些进行低甲基化。成纤维细胞活化蛋白α(FAP)启动子区域(162,243,202-162,243,697,染色体2)中的7个CpG位点中的6个在来自MMD患者的ECFC中被低甲基化。脂多糖诱导的肿瘤坏死因子-α因子(LITAF)启动子区域(染色体16的11,587,448-11,587,875)CpG位点(尤其是第四和第五)主要在来自MMD患者的ECFC中低甲基化。在位于染色体16的28,538,953-28,539,381的核蛋白1(NUPR1)启动子区域内的第五个CpG位点观察到明显的低甲基化。SORT1启动子区(染色体1的109,398,372-109,398,816),其含有11个CpG位点,第八个CpG位点在来自所有三个患有MMD的患者的ECFC中未甲基化,而其在来自正常对照的ECFC中被高度甲基化。这些结果与研究人员的DNA甲基化微阵列的结果一致。
   在用正常对照(N1)的ECFC用5-aza-dC(DNA甲基转移酶抑制剂)处理后,所有五种候选基因的转录表达显着增加。当用20μM的5-aza-dC处理细胞时,FAP和SORT1的mRNA表达上调约2倍。这些结果表明,五种候选基因的转录表达通过DNA甲基化进行表观遗传学调节。研究人员研究了来自9名MMD患者和10名正常对照的ECFC中5个候选基因的mRNA表达水平,以进一步验证研究人员之前的结果。与正常对照相比,MMD患者的ECFC中只有SORT1 mRNA表达显着上调。然而,研究人员只有48%的检测能力(在P = 0.05),用于检测两组之间SORT1mRNA表达的显着平均差异。这表明用于这些分析的样本量不足以检测MMD相关差异研究人员进一步检查了来自8名患有MMD的患者和8名正常对照的使用焦磷酸测序的ECFC中的5个候选基因的特定启动子CpG位点的DNA甲基化状态。在五个候选基因中,只有SORT1上的特异性启动子CpG位点在MMD患者的ECFC中与对照相比显着低甲基化。检测两组间SORT1特异性启动子CpG位点甲基化显着平均差异的能力为0.05%,为93%。这表明用于分析的样本量提供了足够的能力来检测对照组和MMD患者之间的差异研究人员接下来评估是否可以使用一组独立MMD样品(n = 7)和对照(n = 6)中的逻辑回归模型通过特定SORT1启动子CpG位点处的DNA甲基化状态预测MMD。用于该分析的样本大小提供足够的功率(89%)以检测正常对照和患有MMD的患者之间的差异。接受者操作特征曲线分析显示MMD患者与正常对照的良好分离,灵敏度为83.33%,特异性为100%。曲线下面积为0.9762(P = 0.004292)。这些结果表明SORT1上特定启动子CpG位点的DNA甲基化状态 是MMD的潜在生物标志物。
   为了阐明SORT1在血管生成中的功能作用,将SORT1表达质粒构建体瞬时转染到HUVEC中。然后使用Matrigel测定评估HUVEC管形成。转染24小时后,通过RT-qPCR证实SORT1的过表达。在管形成16小时后,与模拟转染的对照相比,SORT1的过表达抑制管长度70%±10.71%
   研究人员进一步探索了SORT1表达如何使用siRNA诱导的SORT1敲低影响HUVEC管形成。转染24小时后,通过RT-qPCR确认敲低内源性SORT1表达。与SiNC模拟转染的细胞相比,si SORT1转染的HUVEC 中SORT1 mRNA的表达降低了59%±4.25%。与模拟转染的对照相比,敲除SORT1表达诱导HUVEC中管长度的显着增加(39%±14.76%)。
   最后,研究人员研究SORT1对主要血管生成因子和RT-qPCR在表达SORT1的 HUVEC中的MMP表达的影响。MMP9,VEGF,血管内皮生长因子受体1(VEGFR1)和FGF2的表达显着增加,而血小板反应蛋白2(THBS2)和血管生成素1(ANGPT1)的表达分别在SORT1中降低约74%和76%。- 转染的HUVEC与模拟转染的对照。这些结果表明,SORT1过表达通过调节其主要血管生成因子和MMP的表达来抑制内皮细胞的血管生成潜力。
   MMD的发病机制仍然知之甚少,迄今尚未鉴定出MMD的可靠分子生物标志物。DNA甲基化是一种主要的表观遗传机制,其改变反映了各种疾病的病理发展,如癌症,神经退行性疾病和自身免疫性疾病。最近,DNA甲基化的改变作为生物标志物用于检测和/或诊断各种疾病,因为它们通过体液如血液,尿液和脑脊液的稳定性,频率和无创可达性。
   在这里,研究人员使用来自三名MMD患者和两名正常对照的ECFC,对基因表达和DNA甲基化谱进行了综合分析,以鉴定与MMD相关的基因。五个基因(APOD,FAP,LITAF,NUPR1,SORT1在初始评估中选择其表达,其表达通过特异性启动子CpG位点的低甲基化而上调。通过用DNA甲基转移酶抑制剂处理证实了五种候选基因的DNA甲基化依赖性转录调节。用5-氮杂-2'-脱氧胞苷处理后,这五种基因的转录表达显着增加。在患有MMD和正常对照的患者的扩展样品中进一步验证了来自MMD患者和正常对照的ECFC中这五种基因的特异性启动子CpG位点处的差异mRNA表达和DNA甲基化状态。仅在SORT1中观察到在特定启动子CpG位点处mRNA表达和低甲基化的统计学显着上调,这也用于容易和准确地区分患有MMD的患者与正常对照(接收者操作特征区域在曲线下0.98,灵敏度83.3%,特异性100%)。使用逻辑回归模型在具有MMD(n = 7)和正常对照(n = 6)的独立样本组中评估。
   所述SORT1的1p13.3轨迹1号染色体内基因编码的蛋白分拣蛋白,它是哺乳动物蛋白液泡10分拣蛋白(VPS10P)结构域受体家族的五个成员之一。它在内质网中产生,作为含有44个氨基酸前肽的前体蛋白,并通过弗林蛋白酶介导的切割进行蛋白水解加工,以在晚期高尔基体区室中产生成熟形式的受体。该受体参与将多种细胞内蛋白质运输至细胞表面或亚细胞区室(如内体和溶酶体),以介导内吞作用和溶酶体降解。最近,据报道,sortilin是脂质代谢和动脉粥样化形成的重要调节剂。之前关于动脉粥样硬化小鼠模型中过表达或缺乏分拣蛋白的研究表明,分拣蛋白强烈影响血浆胆固醇水平和动脉粥样硬化的发展,尽管其在肝脏脂蛋白输出中的作用仍存在争议。一项研究报告,在动脉粥样硬化小鼠模型中缺乏sortilin导致血浆低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平降低和主动脉粥样硬化病变,表明sortilin参与脂质代谢和动脉粥样硬化。其他的研究报告说,在分拣蛋白的小鼠肝脏中敲除增加血浆胆固醇水平。人类全基因组关联分析还表明,过表达SORT1导致降低血浆LDL-C水平和不足SORT1在增加的血浆胆固醇水平的效果。
   需要进一步的研究来确定分拣素在脂质代谢中的调节机制; sortilin还可作为神经递质受体,调节促神经生长因子(proNGF)诱导的神经元活力和功能。越来越多的证据表明,sortilin通过控制proNGF诱导的神经元死亡与β-分泌酶运输引起的淀粉样蛋白前体蛋白加工的改变密切相关,如阿尔茨海默病。分拣蛋白可以在不同细胞类型和组织中执行更多功能。在这里,研究人员证明sortilin参与血管生成。
   研究人员的研究结果表明,SORT1的过表达通过调节血管生成因子和MMP9的表达抑制内皮细胞管的形成。促血管生成因子(例如,VEGF,VEGFR1和FGF2)的表达增加,而通过与Tie2受体的相互作用参与发育的脉管系统的成熟和稳定化的ANGPT1的表达显着降低。SORT1的过度表达。除促血管生成因子外,THBS2(一种内源性血管生成抑制剂)的表达下降,而MMP9表达在SORT1过表达时显着增加。
   MMP9通过释放和激活生长因子和细胞因子促进血管生成,但也通过产生血管生成抑制剂(如血管抑制素)和切割血管生成因子来抑制血管生成。血管生成是一个复杂的过程,涉及多种促血管生成因子和抗血管生成因子之间的动态相互作用。SORT1对血管生成因子的表达调节可能通过扰乱促血管生成因子和抗血管生成因子之间的微妙平衡而导致血管异常发育。研究人员以前曾报道MMD患者血浆中MMP9水平与血管内皮生长因子有关; 这些可能有助于MMD病理学中观察到的内膜增生和侧支血管的形成。先前的研究也显示在CSF中FGF2水平升高,颞浅动脉和患者的MMD硬脑膜,表明FGF2可以在MMD的发病机制中起主要作用。尽管SORT1调节主要血管生成因子表达的确切机制需要进一步研究,但这些结果表明由DNA甲基化依赖性转录调节介导的SORT1的异常过表达有助于MMD的发病机制。
   研究人员的研究结果表明,ECFCs中特定SORT1启动子CpG位点的DNA甲基化状态可作为MMD的可靠,非侵入性生物标志物。

 
烟雾病简介
   烟雾病是一种病因不明、以双侧颈内动脉末端及大脑前动脉、大脑中动脉起始部慢性进行性狭窄或闭塞为特征,并继发颅底异常血管网形成的一种脑血管疾病。由于这种颅底异常血管网在脑血管造影图像上形似“烟雾”,故称为“烟雾病”。
   烟雾状血管是扩张的穿通动脉,起着侧支循环的代偿作用。患者的临床表现复杂多样,包括认知功能障碍、癫痫、不随意运动或头痛,其中最常见的是脑缺血,可表现为短暂性脑缺血发作、可逆性缺血性神经功能障碍或脑梗死,其中TIA常由情绪紧张、哭泣、剧烈运动或进食热辣食物等诱发。
烟雾病
烟雾病分型
烟雾病探秘
 
相关病种
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烟雾病
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